在生物醫(yī)學研究的廣闊天地里,293T(人胚腎細胞)為基因表達、病毒生產等諸多關鍵實驗撐起一片天,而其培養(yǎng)方法,每一步都容不得絲毫馬虎。
細胞培養(yǎng)的開場,培養(yǎng)基的選擇與制備是根基。293T細胞對營養(yǎng)的需求頗為“挑剔”,需調配富含葡萄糖、氨基酸、維生素、無機鹽等多元成分的優(yōu)質培養(yǎng)基,像經典的DMEM培養(yǎng)基,再添上一定比例的胎牛血清,助力其茁壯成長。血清能提供生長因子、激素等關鍵物質,但使用前務必嚴格篩選,確保無支原體、細菌等污染,還要依據細胞生長狀態(tài)精準調控血清濃度,一般在5%-10%區(qū)間浮動,濃度過高易致細胞分化異常,過低則養(yǎng)分不足。

細胞接種環(huán)節(jié),講究恰到好處。從液氮罐中取出凍存的293T細胞株,迅速置于37℃水浴,輕柔晃動使其快速解凍,避免冰晶對細胞造成損傷。待細胞懸液恢復靈動,便在無菌操作臺下,用移液槍吸取適量,均勻鋪灑在預先包被處理好的培養(yǎng)皿中,密度要把控精準,過密會引發(fā)營養(yǎng)競爭、抑制生長,過疏則浪費資源、難起規(guī)模效應,通常每平方厘米接種數千個細胞為宜。
培養(yǎng)環(huán)境仿若細胞的“宜居家園”,溫度恒定在37℃,一絲一毫偏差都可能打亂細胞代謝節(jié)奏;二氧化碳濃度嚴控在5%,維持培養(yǎng)基pH穩(wěn)定,為細胞營造舒適的酸堿環(huán)境。培養(yǎng)箱內濕度也不容小覷,過低易使培養(yǎng)基蒸發(fā)、細胞失水,過高則滋生霉菌風險驟增,常保持在95%左右,還需定期消毒,杜絕微生物“不速之客”。
日常換液、傳代操作是延續(xù)細胞生命的“接力棒”。每隔1-2天,需小心吸除舊培養(yǎng)基,換上新鮮“糧草”,動作要輕緩,莫驚擾細胞。待細胞匯合度達80%-90%,便要及時傳代,用胰蛋白酶消化液輕柔解離細胞,吹打成懸液后按比例分流至新培養(yǎng)皿,如此循環(huán)往復,讓293T細胞在精細呵護下持續(xù)繁衍,為科研源源不斷輸出活力滿滿的“樣本大軍”。