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當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  實戰(zhàn)分享 | 細(xì)胞增殖抑制檢測經(jīng)驗分享:CCK-8檢測

實戰(zhàn)分享 | 細(xì)胞增殖抑制檢測經(jīng)驗分享:CCK-8檢測

更新時間:2024-11-29  |  點擊率:1095


細(xì)胞增殖抑制實驗是細(xì)胞生物學(xué)研究中的常規(guī)操作,尤其在藥物篩選和毒性評估領(lǐng)域中占有重要地位。CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一種廣泛使用的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測方法,因其操作簡便、靈敏度高而受到研究者的青睞。然而,在實際操作過程中,我們可能會遇到各種問題。


本期,我們非常榮幸聯(lián)系到了來自廈門大學(xué)的吳老師,與我們分享她寶貴的科研經(jīng)驗。接下來是吳老師在CCK-8檢測過程中積累的豐富經(jīng)驗和深刻心得,一起來實戰(zhàn)學(xué)習(xí)吧!

作者單位:廈門大學(xué)

? 發(fā)表期刊:

   Nature Communications(IF=16.6)

? 文章標(biāo)題:

Capturing nascent extracellular vesicles by metabolic glycan labeling-assisted microfluidics

引用普諾賽®產(chǎn)品:

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

4T1(小鼠乳腺癌細(xì)胞)

CL-0007

B16-F10

 (小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞)

CL-0319




  實驗設(shè)計階段


問題一:細(xì)胞接種密度不當(dāng)(非常關(guān)鍵)





解決方案

選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種密度至關(guān)重要。過低的密度可能導(dǎo)致細(xì)胞長不起來,而過高的密度則可能導(dǎo)致細(xì)胞過度貼壁或營養(yǎng)不足。通常需要根據(jù)細(xì)胞類型和實驗?zāi)康?,通過預(yù)實驗確定最佳接種密度。一般建議96孔板接種密度是103-104 cells/孔。


問題二:藥物處理時間不當(dāng)





解決方案

藥物處理時間的選擇應(yīng)依據(jù)藥物的作用機制和細(xì)胞類型而定。一般來說,24 h、48 h和72 h是常用的處理時間點,但具體時間應(yīng)根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。





  實驗操作階段


問題一:CCK-8試劑的穩(wěn)定性





解決方案

CCK-8試劑應(yīng)避光保存,并在有效期內(nèi)使用。開瓶后,應(yīng)盡量減少長時間暴露于空氣中,以免影響其穩(wěn)定性和靈敏度。(注意過期的CCK-8試劑就不要再使用了)


問題二:細(xì)胞狀態(tài)不佳





解決方案

在實驗前,確保細(xì)胞處于良好的生長狀態(tài)。細(xì)胞狀態(tài)不佳時,建議不要著急做實驗,這會非常影響實驗結(jié)果。避免使用過度傳代或生長過密的細(xì)胞,因為這可能影響細(xì)胞對藥物的響應(yīng)。





數(shù)據(jù)讀取階段


問題一:讀取值波動大





解決方案

為確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,需將實驗中的每個步驟都盡可能標(biāo)準(zhǔn)化。包括細(xì)胞接種密度、藥物處理時間與濃度以及CCK-8試劑的添加。使用多孔板閱讀器進(jìn)行讀數(shù)時,應(yīng)注意避免邊緣效應(yīng),即邊緣孔的讀數(shù)可能因蒸發(fā)等原因而偏高或偏低。(為減少這種情況的發(fā)生,最好在檢測孔周圍鋪設(shè)一圈無菌水或PBS,減少檢測孔的液體蒸發(fā)。筆者親測非常有效?。?/span>


問題二:背景值過高





解決方案

在添加CCK-8試劑前,應(yīng)充分洗滌細(xì)胞,以去除可能干擾讀數(shù)的介質(zhì)成分。同時,設(shè)置空白對照(僅含培養(yǎng)基和CCK-8試劑)以校正背景值。





  數(shù)據(jù)分析階段


問題一:數(shù)據(jù)不具代表性





解決方案

實驗應(yīng)重復(fù)至少三次以確保數(shù)據(jù)的可靠性。在分析數(shù)據(jù)時,應(yīng)計算標(biāo)準(zhǔn)差或標(biāo)準(zhǔn)誤,以評估數(shù)據(jù)的變異性。另外,酶標(biāo)儀檢測時最好做好不同時間點的檢測,以確定最佳的檢測時間點。


問題二:結(jié)果解釋不當(dāng)





解決方案

在解釋實驗結(jié)果時,應(yīng)考慮所有可能的影響因素,包括細(xì)胞狀態(tài)、實驗操作、試劑質(zhì)量等。應(yīng)結(jié)合其他實驗方法進(jìn)行綜合分析,避免過度解釋單一實驗結(jié)果。





  其他注意事項


溫度和CO?濃度:

確保培養(yǎng)箱的溫度和CO?濃度恒定,因為這些因素會直接影響細(xì)胞的生長和代謝。


試劑的兼容性:

某些藥物或化學(xué)物質(zhì)可能與CCK-8試劑發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致誤讀。在使用新藥物時,應(yīng)先進(jìn)行小規(guī)模的兼容性測試。


數(shù)據(jù)記錄和管理:

詳細(xì)記錄實驗的每一個步驟和條件,這對于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析和問題排查至關(guān)重要。




總結(jié)



總的來說,CCK-8是一種有效的細(xì)胞增殖和毒性的檢測方法,但其準(zhǔn)確性和可靠性在很大程度上取決于實驗設(shè)計的合理性、操作的準(zhǔn)確性以及數(shù)據(jù)分析的嚴(yán)謹(jǐn)性。遇到以上問題時,可以參考上述提供的解決方案,有效提高實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。


非常感謝吳老師關(guān)于CCK-8檢測常見問題及解決方法的經(jīng)驗分享,希望這些經(jīng)驗?zāi)軐Υ蠹业难芯抗ぷ饔兴鶐椭?。同時,我們也熱烈歡迎更多老師投稿,分享您在科研領(lǐng)域的干貨和心得體會,共同促進(jìn)科研交流和進(jìn)步!


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