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細胞學(xué)堂 | 一文揭秘細胞空泡之謎

更新時間:2024-07-05  |  點擊率:3126

細胞中的空泡是指在光學(xué)顯微鏡下清晰可見的一種泡狀結(jié)構(gòu),其光學(xué)特性與細胞質(zhì)形成鮮明對比。當細胞內(nèi)部出現(xiàn)這種具有獨-特光學(xué)特征的泡狀結(jié)構(gòu)時,我們稱之為細胞空泡化現(xiàn)象。


本期細胞學(xué)堂,我們就來聊一聊細胞空泡化現(xiàn)象產(chǎn)生原因以及如何解決。


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細胞空泡的來源


細胞空泡的來源廣泛,主要源自細胞內(nèi)的多種膜結(jié)構(gòu)細胞器,如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、高爾基體等。這些細胞器在特定的生理或病理條件下,可能經(jīng)歷一系列復(fù)雜的生物化學(xué)過程,都可能導(dǎo)致細胞內(nèi)部形成空泡。

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圖1. 光學(xué)顯微鏡下的細胞空泡



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細胞產(chǎn)生空泡的原因及解決辦法


1

細胞老化

在原代細胞培養(yǎng)的過程中,由于細胞老化而出現(xiàn)空泡的情況較為常見。原代細胞體外增殖能力有限,當細胞在體外培養(yǎng)時間過長,會因自發(fā)老化而產(chǎn)生空泡,甚至導(dǎo)致細胞死亡。同樣的,對于細胞系來說,隨著傳代次數(shù)的不斷增加,細胞也可能因老化而產(chǎn)生空泡。

-解決方法-

對于原代細胞,建議使用較低代次的細胞實驗,并盡量避免長時間的體外培養(yǎng),以減少細胞老化和空泡形成的風(fēng)險;對于細胞系,應(yīng)嚴格控制傳代次數(shù),避免使用高代次細胞,以防止細胞因過度傳代而老化,進而產(chǎn)生空泡等問題。

2

更換培養(yǎng)基或血清或培養(yǎng)基理化性質(zhì)改變

更換細胞使用的培養(yǎng)基或血清,細胞可能會出現(xiàn)不適應(yīng)的情況,導(dǎo)致空泡的產(chǎn)生;細胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基,若因配制錯誤、儲存不當、過期仍使用或是血清質(zhì)量不過關(guān)等,均可能引發(fā)培養(yǎng)基的理化性質(zhì)如pH、滲透壓等發(fā)生改變,進而影響細胞狀態(tài),甚至導(dǎo)致細胞出現(xiàn)空泡。

-解決方法-

細胞剛到貨時不建議直接更換培養(yǎng)基和血清,為了避免細胞不適應(yīng),可以將原瓶培養(yǎng)基和自配培養(yǎng)基過渡使用

配制新鮮培養(yǎng)基,并調(diào)整到合適的pH和滲透壓,再進行細胞培養(yǎng)。推薦您使用普諾賽®細胞培養(yǎng)基,產(chǎn)品種類齊全,擁有嚴格的質(zhì)控體系,并可根據(jù)需求提供定制化服務(wù),幫助您有效規(guī)避因培養(yǎng)基質(zhì)量問題導(dǎo)致的細胞空泡化甚至死亡的風(fēng)險。

3

細胞消化不當

在處理如貼壁細胞等需要消化的細胞時,解離試劑的選擇、消化時間的控制、操作力度的把握等都至關(guān)重要。解離試劑選擇不當,消化時間過長或操作力度過大等均可能導(dǎo)致細胞受損,進而引發(fā)細胞空泡的產(chǎn)生。

-解決方法-

針對不同細胞選擇合適的解離試劑、控制消化時間,在消化過程中操作輕柔,最-大程度降低消化過程對細胞的損傷。推薦您使用普諾賽®細胞解離試劑,產(chǎn)品種類眾多,總有一款滿足您的細胞消化需求。

4

傳代或換液不及時

細胞長滿后未及時傳代或細胞長時間未換液,會導(dǎo)致培養(yǎng)過程中細胞代謝副產(chǎn)物的累積和營養(yǎng)物質(zhì)的耗盡,可能誘導(dǎo)細胞自噬的發(fā)生,進而細胞出現(xiàn)空泡化。

-解決方法-

定期觀察細胞生長狀態(tài),及時傳代和換液。通常細胞匯合度80%左右時傳代2~3天需更換一次新鮮培養(yǎng)基。

5

細胞污染

在細胞培養(yǎng)的過程中,若出現(xiàn)細菌、支原體、黑膠蟲等污染,將會導(dǎo)致細胞狀態(tài)明顯變差,并可能引發(fā)細胞產(chǎn)生空泡等異常現(xiàn)象。

-解決方法-

細胞培養(yǎng)過程中,增強無菌操作意識,使用無菌試劑、耗材。對于支原體、黑膠蟲等不易察覺的污染,可以定期檢測或空培確定是否發(fā)生污染。及時發(fā)現(xiàn),及時處理,有效防止污染范圍的擴大。

6

細胞藥物處理

在細胞實驗中,研究人員可能會加入特定的藥物(如氯喹、氨基糖苷類抗生素、細胞凋亡誘導(dǎo)劑等)對細胞進行誘導(dǎo)處理。這些藥物通過影響細胞的代謝過程誘導(dǎo)細胞發(fā)生特定的生物學(xué)變化,但也可能產(chǎn)生細胞毒性,進而可能導(dǎo)致細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡甚至引發(fā)細胞死亡。

-解決方法-

在使用藥物進行細胞誘導(dǎo)處理時,可根據(jù)實驗設(shè)計需要,調(diào)整藥物的濃度和處理時間,降低藥物對細胞的毒性作用。



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細胞空泡化是否可逆


細胞空泡化是否可逆主要取決于空泡形成的原因和細胞狀態(tài)。具體而言:

如果空泡形成是由短期的培養(yǎng)環(huán)境變化(如溫度波動、運輸過程中的刺激等)所誘發(fā)的細胞應(yīng)激反應(yīng),當不利因素消除時并恢復(fù)細胞至其適宜的生長環(huán)境后,細胞可能會恢復(fù)到正常的形態(tài)和功能。

如購買常溫發(fā)貨的細胞,因快遞運輸刺激,細胞到貨時可能出現(xiàn)空泡(見圖2)。恢復(fù)正常培養(yǎng)條件并穩(wěn)定傳代后,細胞空泡會消失(見圖3)。

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圖2. MC3T3-E1 Subclone 14細胞經(jīng)過快遞運輸刺激收貨時細胞狀態(tài)


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圖3. MC3T3-E1 Subclone 14細胞穩(wěn)定傳代后


當細胞因狀態(tài)變差、培養(yǎng)條件改變、污染等不利因素而出現(xiàn)空泡化時,意味著細胞的結(jié)構(gòu)和功能已經(jīng)遭受了嚴重的破壞,其空泡化過程往往呈現(xiàn)出不可逆性,最終可能導(dǎo)致細胞死亡。


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普諾賽®

細胞培養(yǎng)基



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普諾賽®

細胞解離試劑





以上就是關(guān)于細胞空泡產(chǎn)生原因及解決方法詳解,更多細胞培養(yǎng)干貨,請持續(xù)關(guān)注公眾號細胞學(xué)堂專欄~


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